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大鼠主动脉内皮细胞的分离培养
方法：分离大鼠主动脉,直接贴壁于培养皿中,荧光倒置显微镜观察细胞形态,免yi组化Ⅷ因子相关抗原染色鉴定细胞.结果:约24小时组织块边缘有游离的 新生细胞长出,7天即融合成片.消化传代后细胞呈短梭形或三角形,单层生长,铺路石状,Ⅷ因子表达阳性,呈指数增殖.冻存后复苏细胞活性均超过90%.结 论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法,冻存细胞存活率高,为体外研究提供了稳定的模型.
脂质体瞬时转染
1、细胞H9C2 (Hela) 6孔板Hela1x10°/孔。
2、转染前换上没有抗sheng素的DMEM+胎清(10%)。
3、将质粒DNA (约2-4ul) 2ul 加入dorf管中+DMEM至50u1。
4、脂质体5ul补培养基至50ul混匀静止5分钟(质粒与脂质体比例为1:2或1.5:2.5)。
5、将含有脂质体的培养基与含质粒的混合总体积100ul室温放置30分钟。
6、吸取混合物均匀加入每一个孔中。
7、将6孔板放入培养箱中继续培养6小时后吸出培养基换上新配置的培养基DMEM6ml+胎清600u1+三抗300u1。
8、培养24小时。
细胞检测服务
作为生物体结构和功能的基本单位，细胞在机体的各项新陈代谢的生命活动中发挥着重要的作用，与此同时，细胞的生理过程，在一定程度上也是机体生命活动的反应。因此利用多种精密仪器，结合特异性的检测试剂，对体外培养的细胞直接检测其增殖的基本过程，或对细胞进行不同的处理后检测细胞生活周期内各项指标的变化，从而深入揭示细胞新陈代谢的具体机制。3、利用WesternBlot检测LC3-II/比值的变化以评价自噬形成自噬形成时，胞浆型LC3(即LC3-I)会酶解掉一小段多肽，转变为(自噬体)膜型(即LC3-ID，因此，LC3-II/比值的大小可估计自噬水平的高低。
BrdU染色原理
BrdU (5-脱氧尿核苷)是胸腺的衍生物，常用于标记中新合成的DNA,可代替胸腺选择性整合到细胞中新合成的DNA中(细胞周期S期)。这种掺入可以稳定存在，随着DNA进入子细胞中BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。BrdU特异性可以用于检测BrdU的掺入，从而判断细胞的增殖能力。7%的琼脂糖和2xDMEM培养基在无菌试管中相混以后，再向管中加入0。
zhu射或细胞培养后利用抗Brdu单，ICC染色，显示增殖细胞。同时结合其它细胞标记物，双重染色，可判断增殖细胞的种类，增殖速度，对研究细胞动力学有重要意义。因组织细胞内无内源性Brdu存在，所以Brdu应用较广掺入双链DNA内的Brdu,以氢链与腺呤结合，不能直接与抗Brdu反应，需经解链使Brdu暴露方能被染色。自噬形成时，GFP-LC3融合蛋白转位至自噬体膜，在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色荧光斑点，一个斑点相当于一个自噬体，可以通过计数来评价自噬活性的高低。常用的解链方法为盐酸加热、蛋白酶处理等，使DNA双链部分单链化，抗Brdu小鼠单与增殖细胞核内的Brdu结合，再经酶标抗小鼠IgG孵育、
